发布时间 : 星期三 文章2021版浙江新高考选考生物一轮复习：第31讲 微生物的利用更新完毕开始阅读fddaaac38562caaedd3383c4bb4cf7ec4afeb6c9
1．菌液划线分离的方法
2．划线分离操作中的相关问题
在划线操作的第一步以及之后每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束后，还需要灼烧接种环。
项目 第一次灼烧 之后每次划 线前灼烧 杀死上次划线结束后残留在接种环上的菌种 划线结束后灼烧 杀死接种环上残留的菌种，避免其污染环境或感染操作者 目的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 ①在灼烧接种环后，要待其冷却后才能伸入菌液，以免接种环温度太高杀死注意 事项 菌种； ②第二次及以后的划线要从上一次划线的末端开始； ③划线时用力大小要适当，防止用力过大划破培养基 3.进行恒温培养时，要将培养皿倒置 如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则菌落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此恒温培养时，培养皿必须倒置。
4．保存菌种
用接种环取出单个菌落，用划线分离法接种在斜面培养基上，37 ℃ 培养24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。
[题组冲关]
1．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是( ) A．培养基分装到培养皿后进行灭菌
B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次
解析：选B。培养基灭菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿需放在恒温箱中进行培养，一般每隔12 h或24 h观察一次。
2．(2020·浙江温岭选考模拟)下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：
C.扩大培D.划线分离A.配制E.菌种
→B.灭菌→养（液体→和培养（固→
培养基保存
培养基）体培养基）
(1)A过程配制培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持________。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的________(填“前面”或“后面”)。
(2)D过程与C过程相比，培养基中另外需添加的物质是________。E过程所需的温度是________。
(3)与微生物培养不同，植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的________。
(4)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是________。
A．接种环和镊子 C．发芽培养基和生根培养基
B．三角瓶和广口瓶 D．用于培养的幼茎和幼芽
解析：(1)氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再调节酸碱度，会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。菌种应置于4 ℃冰箱中保存。(3)植物组织培养培养基中需加入一定比例的植物激素。(4)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽只能进行消毒，不能进行灭菌操作，否则会导致细胞死亡。
答案：(1)渗透压 前面 (2)琼脂 4 ℃ (3)植物激素 (4)D
分离以尿素为氮源的微生物
1．实验原理：利用尿素的细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。其反应式为(NH2)2C===O＋H2O――→2NH3＋CO2，生成的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由红黄色变成红色。
2．实验步骤
脲酶
3．预测本实验的结果：LB全营养固体培养基上的菌落多而杂；尿素固体培养基上的菌落少而纯；一定时间内，菌落周围出现红色区域。用浓度为10更容易形成单菌落的是10
－5
－4
和10
－5
土壤稀释液接种，
土壤稀释液。
[基础诊断]
(1)尿素培养基配制时各种成分均需要过滤灭菌(×)
(2)脲酶分解尿素为氨气，酚红指示剂遇氨气(碱性)变红色(√) (3)涂布分离后不能倒置培养皿，防止涂布的菌液流出(×)
(4)分离以尿素为唯一氮源的微生物时，尿素培养基中加入琼脂作为凝固剂(×) (5)制备土壤悬液时，在无菌条件下，将土样与无菌水混合摇匀后尽量吸取土样，以增加微生物的数量(×)
(6)涂布分离法分离细菌，一般采用移液器吸取0.1 mL样液加到含有相应培养基中(√) (7)涂布分离法能够计数菌落数，采用该方法统计出的细菌数通常偏少(√) (8)尿素培养基上的微生物数量比全营养培养基上微生物数量多(×)