发布时间 : 星期三 文章2021版浙江新高考选考生物一轮复习：第31讲 微生物的利用更新完毕开始阅读fddaaac38562caaedd3383c4bb4cf7ec4afeb6c9
因酶失活而无法生存。
2．消毒与灭菌的辨析 项目 条件 结果 常用方法 煮沸消毒法 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 巴氏消毒法 化学药剂 消毒法 灼烧灭菌法 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 3．细菌的两种分离方法的比较 项目 工具 划线分离法 接种环 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释原理 分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落 特点 目的 方法简单，但不适宜计数 涂布分离法 玻璃刮刀 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 单菌落更易分开，但操作复杂 应用范围 日常用品 不耐高温的液体 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 接种工具 玻璃器皿、金属工具 培养基及容器 消毒 使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 [题组冲关] 1．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( ) A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B．倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．用记号笔标记培养皿中的菌落时，应标记在皿底上
解析：选D。高压灭菌结束后应自然冷却，等灭菌锅压力与大气压相同时打开锅盖，A项错误；倒平板时，不能将皿盖放在一边，B项错误；接种环经火焰灭菌应冷却后挑取菌落，C项错误；标记培养皿中的菌落时，记号笔应标记在皿底上，D项正确。
2．(2020·宁波模拟)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是____________________。
(2)该小组采用划线分离法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是__________________________________。
(3)示意图A和B中，________表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中____________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高____________的利用率。
解析：(1)在涂布接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，目的是检测培养基平板灭菌是否合格，不能留有杂菌。(2)用划线分离法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后的划线时，从上一次划线末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)涂布分离法接种培养后得到的结果应为图B。(4)振荡可以使细菌分散，更有利于细菌利用培养液中的营养物质，并且可以使培养液中的
溶解氧增多。
答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格
(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧 营养物质
大肠杆菌的培养和分离
1．大肠杆菌
(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。
(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2．大肠杆菌的培养和分离实验
(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。
(2)实验步骤
培养基灭菌 ↓ 倒平板 ↓ 接种 ↓ 划线分离 ↓ 培养观察 (3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
[基础诊断]
(1)大肠杆菌是革兰氏阳性菌，既能进行需氧呼吸又能进行厌氧呼吸(×)
(2)利用LB液体培养基和LB固体培养基分别进行分离培养和扩大培养微生物(×) (3)单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是筛选高表达菌株的简便方法(√) (4)常用的微生物分离方法有划线分离法和涂布分离法(√)
(5)划线分离法的原理是利用接种环挑去一个菌种，接种到固体培养基上，经培养后得到单菌落(×)
(6)划线分离操作简便，但涂布分离更容易得到单菌落(√) (7)高压蒸汽灭菌法是进行各种无菌操作都需要进行的灭菌方法(×) (8)划线分离时，接种环只蘸取一次菌液，每次划线前均需灼烧接种环(√) (9)进行菌种扩大培养和分离培养需要将培养基倒置放在恒温培养箱中(×)
培养皿倒置(盖在下面)，放在37 ℃恒温培养箱中培养12～24 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落 50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h 用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿