发布时间 : 星期日 文章高中生物 专题5课题3 血红蛋白的提取与分离练习 新人教版选修1更新完毕开始阅读ba58b9ba00f69e3143323968011ca300a7c3f67b
(1)样品获取：向新鲜猪血中加入________________以防止血液凝固，静置一段时间后取上层血浆。
(2)盐析法粗提蛋白质：
①向血浆中加入一定体积的饱和度为55%的(NH4)2SO4溶液，充分混合后静置、离心，取沉淀物，向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解；
②重复步骤①2～3次，最后用生理盐水将沉淀溶解即得到粗提品，盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是
____________________________________________________________________________________________________________________________________，
重复步骤①的主要目的是_________________________________________。
(3)透析除盐：将粗提品装入透析袋，以pH为7.4的缓冲液作透析液，每隔4 h更换一次透析液，每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4的量。利用缓冲液作透析液的原因是_________________________________________________
_______________________________________________________________。 检测中，若观察到透析液___________________________________________时， 即可终止透析。
(4)凝胶色谱法分离：透析后的样品经凝胶柱洗脱，获得纯净血浆某白蛋白样品。 (5)分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性并解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，使电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。如图为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。根据电泳结果，某同学得到“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理
由
是
：
＋
________________________________________________________
________________________________________________________________________________________。
解析 (1)为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝剂柠檬酸钠。(2)盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是该血浆白蛋白在饱和度为55%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低；重复步骤①的主要目的是除去更多的杂蛋白。(3)强酸、强碱、温度过高都会使蛋白质发生变性，利用缓冲液作透析液的原因是避免pH发生变化对蛋白质结构造成破坏；检测中，若
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观察到透析液中不出现黄色或红棕色沉淀时，即可终止透析。(5)电泳的原理是待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的大小、形状等的不同，使带电分子产生不同的迁移速率；本实验只能判断提取的血浆某白蛋白有两种大小不同的肽链，而不能判断肽链的条数。
答案 (1)(适量的)柠檬酸钠
(2)该血浆白蛋白在饱和度为55%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低 除去更多的杂蛋白 (3)避免pH发生变化对蛋白质结构造成破坏 不出现黄色或红棕色沉淀
(4)不可靠，结果只能说明提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条
13．(10分)随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”：
实验准备 配制缓样品处理 洗涤、
―→―→蛋白质粗分离 透析―→
冲液血细胞悬液破碎、离心等纯化、纯度鉴定
凝胶色谱法、电泳等
请回答下列有关问题：
(1)样品处理中红细胞的洗涤要用____________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH 7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是________________。
(2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是____________________，若要尽快达到理想的透析效果，可以________________________(写出一种方法)。
(3)血红蛋白的纯化是通过________法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。
(4)电泳利用了待分离样品中各种分子的________________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。
(5)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如上图所示。由图可知携带者有________种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是________________________________。
解析 试题分析：(1)样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心。向红细
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胞悬液中加入一定量的低浓度pH＝7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破)。
(2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去小分子杂质。
(3)电泳利用了待分离样品中各种分子的带电性质以及分子大小、形状等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离。
(4)由如图2可知携带者有2种血红蛋白，因为携带者具有(控制血红蛋白的)一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质。
答案 (1)生理盐水 渗透(作用)原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破)
(2)除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 (3)凝胶色谱法 (4)带电性质以及分子大小、形状
(5)2 携带者具有一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质
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