发布时间 : 星期日 文章临床生化知识点整理（精品）更新完毕开始阅读b8b4b0c27375a417876f8f74
送系统、样本分析系统（血细胞系统、凝血系统、生化系统、免疫系统等）串联起来，组成流水线，再加上LIS和计算机硬件，形成大规模的全检验过程的自动化。
分立式自动生化分析仪：（discrete automatic biochemical analyzer）是按人工操作的方式编排程序，并以有序的机械操作代替手工操作，按程序依次完成加样、加试剂、搅拌、反应杯保温孵育、吸光度检测等各项操作。
分立式自动生化分析仪：
样品盘 ：放置待测样品的转盘，可放置一定数量的样品杯或不同规格的采血试管，通过样品盘的转动来控制不同样品的进样
? 一次性装载样本大 ? 转动恒定，故障率低 样品架 ：
? 每个样品架可放数只样品杯或采血试管（多为4只，5只或10只）。样品架
上的条形码或编码孔可识别样品架号及样品位置号 ? 样品架的移动通过样品传送带来进行
? 样品架适合模块组合式自动生化分析仪和全实验室自动化系统
（一）样本和试剂处理系统 2.试剂盘和试剂瓶
安装在具有冷藏功能的试剂仓内。试剂盘可放置一定形状的试剂瓶，不同分析仪试剂瓶的容量和形状不同
3.取液装置
? 样本和试剂的吸取由带定量吸液器和样品针或试剂针的机械臂完成
? 样品针和试剂针具有多种功能：液面感应功能、防撞功能、阻塞报警功能 ? 取样装置
? 由取样针、取样臂、取样管路、取样注射器和阀门组成，能定量吸取样品并
加入到反应杯
? 不同分析仪的取样容量有不同的范围，一般为2～35μl，步进0.1微升不
等
? 加试剂装置
加试剂装置用于定量吸取试剂加入反应杯，可加入试剂容量一般为20～350μl。步进1～5微升不等，取样精度在1微升左右
注射器方式加试剂：组成部件与取样装置类似，其液面感应系统能检测并提示试剂剩余量
（二）反应系统
1.反应盘和反应杯
? 反应盘为搁置反应杯的圆盘状装置。
? 反应杯由透光性好的石英玻璃、硬质玻璃或丙烯酸塑料制成，容量为80μl～500μ
l不等，是样本与试剂进行化学反应的场所。
反应盘：
? 100只或更多的反应杯围成一圈组成 ? 在测定过程中反应盘作恒速的圆周运动
? 在静止时向反应杯中加入样品、试剂或进行搅拌混匀
? 当反应盘恒速圆周运动经过检测窗口的比色杯可进行吸光度检测
反应杯（比色杯）
a) 是样品与试剂进行化学反应的场所，同时用作比色杯
b) 由透光特性好的硬塑料或硬质石英玻璃或丙烯酸塑料制成，自动冲洗备用 c) 比色杯光径：不同分析仪光径0.5～1cm不等，大多数分析仪在计算时将其
折算为1厘米光径
d) 现代生化仪多具备比色杯自动冲洗装置和自动空白检查功能
2.混匀装置
? 混匀的方式有机械振动、搅拌和超声混匀等，目前多采用搅拌方式，超声混匀可杜
绝携带污染，极大程度减少泡沫产生 ? 混匀器
? 反应杯里的样品与试剂通过搅拌棒搅拌而充分混匀 ? 其工作方式大多为旋转式搅拌，也有震动式搅拌方式。
? 也设置了防止搅拌棒在不同反应液之间携带交叉污染的清洗措施
3.恒温装置
? 空气浴
优点：升温迅速，保养简单。 缺点：温度易受环境影响。
? 水浴
优点：温度均匀、稳定。
缺点：升温慢，开机预热时间长，受水质变化影响
? 恒温液循环间接加热法
优点：温度均匀、稳定，不需要特殊保养。 缺点：恒温液成本较高。 （三）检测系统 1. 光路系统
? 由光源、比色杯和分光元件（滤光片、棱镜或光栅）等组成
? 主要以后分光光路系统为主，光源→反应液→分光元件→单色光→信号检测器 2. 信号检测器 （四）清洗系统
? 样品针、试剂针和搅拌棒在用于下一个样品、试剂或反应杯前都要进行清洗，多数
为去离子水冲洗。 ? 空白杯的吸光度检查 （五）计算机控制系统
? 自动开关机、系统自检、样本和试剂识别、分析测定、结果计算、数据储存和输出、
自动维护和保养等功能
? 干化学式生化分析仪（dry chemistry automatic biochemical analyzer）与配套
干片试剂组成一个检测系统，采用的是干化学分析技术
? 将生化检测所需的试剂固定在具有多层复合膜结构的载体上，形成固相试剂，称为
干片试剂。
? 干化学（dry chemistry）技术：
将测定一个项目所必需的部分或全部试剂固定在具有一定结构的载体上，形成固相试剂，在试剂载体上滴加液态样品。
干化学式生化分析仪的结构和功能
? 仪器优点
? 完全脱离了传统的采用试管和吸管的分析方法，仪器操作简便，测定速度快，
灵敏度和准确度与典型的分立式仪器相近
? 仪器缺点
? 对环境要求比较高，尤其是空气的温度和湿度 ? 成本较“湿化学”略高，多用于急诊
自动生化分析仪常用分析方法 1.终点法
? 当反应达到平衡时产物不再增加，吸光度不改变，根据平衡点吸光度的大小即能算
出被测物浓度，这种方法称为终点法（end assay）。 一点终点法（one point end assay）
? 在反应达到平衡时选择一个测光点的吸光度计算待测物浓度
两点终点法（two point end assay） ? 常应用于具有双试剂的测定项目中。
? 第二试剂（R2）加入前，选择某个时间点作为第一个测光点，此时的吸光度相当于
样本空白（Am）。
? 加入第二试剂后待测物开始反应，并经过一定时间反应达到平衡，此时选择第二个
测光点测定吸光度（An），两个测光点吸光度之差用于计算待测物浓度，称为两点终点法
优点：该法能有效地消除溶血、黄疸和脂浊等样品本身光吸收造成的干扰 2.固定时间法（fixed-time assay）
? 指在时间-吸光度曲线上选择两个计算点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，
这两点的吸光度差值用于结果计算
3.连续监测法（continuous monitoring assay）又称速率法（rate assay），是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线的线性期内4个以上测光点测定吸光度，计算单位时间吸光度变化值ΔA/min，此即为酶促反应的初速度，其大小与被测酶活性成正比。
4．浊法（turbidimetric Assay）是通过测定微粒性物质对光的散射或透射强度来测定物质的浓度，主要用于测定能形成悬浮体的颗粒物质。
比浊法也采用终点法尤其是两点终点法进行检测。比浊法可分为化学比浊法和免疫比浊法。 1.化学比浊法
基本原理：待测物在一定条件下反应形成不可溶的微细沉淀（微粒），这些微粒的存在使透过的光减弱，通过检测透光强度，计算出样本中物质的浓度 2.免疫比浊法 免疫比浊法
? 免疫散射比浊法（Immune scatter turbidimeter）
? 免疫透射比浊法（immunity transmission turbidimeter）
? 基本原理：抗原与抗体发生反应形成的可溶性免疫复合物，通过某种方法使其自液
相析出，形成微粒，这些微粒具有对光的反射和折射能力，通过检测散射光或透射光的强度，计算样本中待测物的浓度。
验项目除了涉及自动生化分析仪，还涉及仪器所使用的试剂、校准品、质控品和检测程序等，如有手工操作步骤，还应包括操作人员，这些要素组成的分析测定系统称为检测系统（testing system）
校准（calibration）也称定标，是指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的值、实物量具或参考物质所代表的值与相对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。
1.校准的定义 2.校准方法 3.校准品
? 校准品（calibration material）或校准物，是含有已知量 待测物，用以校准
检测系统的测定值。
4.酶活性测定的校准 检测系统主要的性能指标 1. 准确度和精密度 2. 分析速度
指1小时内完成的测试数（所有已测定样本的项目数之和），用tests/h来表示 （1）加样周期（sampling cycle）（2）测试循环 3. 实用性
? 检测能力、便捷性、检测成本
? 1. 分立式生化分析仪的主要结构、功能、特点 ? 2. 干化学式生化分析仪的检测原理和特性 ? 3. 自动生化分析仪常用分析方法 ? 4. 临床生化自动分析仪的性能指标 ? 5. 自动生化分析仪常见分析参数的设置
蛋白质检验
蛋白质的测定
1、血清蛋白质电泳Electrophoresis of serum protein
CAME: 醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose acetate membrane electrophoresis) PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis) AGE: 琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis) 血清蛋白质CAME的图谱特点
血清总蛋白测定
（一）化学法Chemical method 凯氏定氮法 Kjeldah method 双缩脲法* Biuret method