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个数<100个–在干燥的、静止的情况下。 无菌线S6验证SOP
目的：整个生产线的无菌效果验证，认证从灭菌到无菌缸到充填及旋盖的全部过程。
应用：用经过灭菌过的LG培养基来充填并且在正常的无菌生产条件下加盖。所有的样品在一定时间的放置后要进行一次彻底的检查，同时LG培养基要在充填前保存72小时，被延长的产品的无菌状态需要被认可。测试中所使用的瓶子和瓶盖要和将来生产中使用的一致。 第一部分：准备工作
一.可能影响影响验证的因素确认及解善 1） 2） 3）
对吹瓶风道空气过滤器的维护，对风道内部的擦洗 瓶盖/空瓶检验合格
安排对灌注机和清洗消毒系统设备进行自查（如灌装机查漏，杀菌液浓度
确认等） 4） 5）
膜包机长时间不用，要在试验开始前调试好 保温室（空间容量,温湿度,光照等）
二．培养基的准备（中性，PH6.5-6.8） 培养基：LG培养基的配方（10000L）：
1 2 3 4 5 葡萄糖（食品级） 酵母提取物（粉状分析级） 蛋白胨（食品级） 硫酸铵（化学纯级） 磷酸二氢钾（化学纯级） 200 kg 35 kg 20 kg 20 kg 10 kg 6 硫酸镁（化学纯级） 10 kg LG培养基的配制（10000L）：
1. 实验前对培养基原材料以以上比例进行预调配小样，并按照比例进行添加酸碱，对pH进行测试。而且需要事先检测培养基是否能够被污染。 2. 向混合缸中注入2000L 60℃的处理水。
3. 将20 kg蛋白胨用300L 60℃的处理水预混，通过滤网加入混合缸中。搅拌直至蛋白胨彻底溶解。
4. 在搅拌器开启的情况下将其余的组分按下列次序加入：
酵母提取物35 kg，葡萄糖200 kg，磷酸二氢钾10 kg，硫酸铵20 kg，硫酸镁10 kg
（注意：酵母提取物必须采用粉状分析级的。
投料顺序按照上述顺序进行，而且必须等待前一组分完全溶解后才能加
入后一个组分。
如能将这些组分分别使用小料缸预溶解后通过5u滤网加入混合缸中更
好。）
5. 搅拌直至所各组分彻底溶解。目测检查。 6. 用20oC的处理水将混合缸定容至10000L。
7. 至少30分钟搅拌，取样测试pH，浊度和白利度。将LG培养基pH值调至6.5-6.8（参考添加量：110-130g化学纯NaOH加入1吨LG培养基），谨慎起见，酸碱第一步添加量参考添加量下限的80%，然后按照实际情况，逐渐加入余下量直至pH达标为止。
8. 在2小时内将培养基在137℃，30秒或相当的温度和时间灭菌。储存于无菌缸中，否则可能会引起微生物过度繁殖，造成培养基内部浑浊。
第三部分：灌注（测试中所使用的瓶子和瓶盖要和将来生产中使用的一致。） 1. 确认生产线各个设备都在正常无故障状态（前处理、动力中心、PET、UHT、
无菌罐、氮气系统、膜包机等后工序）。
2. 确认参与试验的的人员到位：车间所有员工（溶糖、萃茶、套标除外）、维修工、
微生物品控员、成品品控员、跟班品控员、SCMC工程师、克朗斯工程师、艺康工程师。
3. 调配系统、灌装机、无菌水、UHT、无菌罐、氮气系统进行CIP、SIP，记录参
数
4. 按照要求调配LG培养基，调配结束后立即通过UHT灭菌打入无菌罐进行储存。 5. 灌装机进行碱性COP、酸性COP，产前准备，SOP，记录参数
6. 开机生产，按照要求进行灌装，每次分为半瓶不充氮、半瓶充氮两种类型进行
生产，在小于35°C的条件下灌注培养基，喷码时注意区分。如果检测的是72小时，则在24小时的时候灌注三分之一；在48小时灌注三分之一；在72小时灌注剩下的三分之一。合计灌注10000瓶。每次间隔都要进行正常的COP/SOP处理过程。灌注需全速进行（36000瓶/小时）。半瓶瓶子中留出足够的空间(至少50ml左右) 。每5分钟检查瓶子中残留消毒剂的量，根据操作说明确保无残留。 7. 现场人员安排
安排人员在生产线上，对高歪盖产品进行挑拣。所有挑拣人员必须在实验之前，对双手进行全面消毒。安排品控员在线上对卫生状况进行巡查。所有从生产线掉落的培养基和倒在输送带上的培养基都不得放回生产线。 8. 灌装结束按照正常的生产程序进行结束生产。
注：为防止有高歪盖或其它样品损失，注入机在灌注时均适量放大样品量。 第四部分：S6验证过程中无菌流体的取样
1. 本试验可能持续72小时以上，品控应准备好培养基及空气取样过滤器
2. 品控人员需依据无菌灌装手册中的取样频率，进行微生物取样-无菌水（UHT总出水口、冲瓶、SIP冷却水），无菌空气（冲瓶、洗盖和灌注间，HC），以及LN2取样。
3. 对于无菌培养基（V105），需放在无菌瓶中保温培养。
4. 对调配完成的LG培养基料液，空盖，空瓶，洁瓶，洁盖进行取样并且进行总菌，霉菌/酵母测试，以便对未来出现的危机进行分析。
5. 灌注结束后对ISOLATE设备进行涂抹。灌注过程中对ISOLATE内部空气进行总菌，霉菌/酵母的取样测试（各1000L） 第五部分：样品翻检
在30-35°C条件下，将样品保温14天；培养基培养3天后倒立瓶子，使瓶内液体与内瓶壁以及盖子充分接触，7天后第一次翻检，14天后再次翻检。保温结束后，肉眼观察所有瓶子是否有微生物污染(膨胀的、浑浊的、变颜色的、絮状的、产气等)。作为阳性对照，向未污染瓶子内的培养基接种枯草芽孢杆菌，以确保培养基是适合该菌生长的。
注：样品必需在不同的砧板上放置并贴上标识。（本次试验需10个塑料砧板） 第六部分：参考标准
通过 失败 无菌线S7验证SOP
目的：注入封盖系统的无菌环境验证，认证从灭菌到充填及旋盖的整个过程的无菌效果。
应用：用经过灭菌过的LG培养基来充填并且在正常的无菌生产条件下加盖。所有的样品在一定时间的放置后要进行一次彻底的检查。测试中所使用的瓶子和瓶盖要和将来生产中使用的一致。 第一部分：准备工作
一.可能影响影响验证的因素确认及解善 6） 7） 8）
对吹瓶风道空气过滤器的维护，对风道内部的擦洗 瓶盖/空瓶检验合格
安排对灌注机和清洗消毒系统设备进行自查（如灌装机查漏，杀菌液浓度
10000瓶测试 <1 ≥1 确认等） 9）
膜包机长时间不用，要在试验开始前调试好
10） 保温室（空间容量,温湿度,光照等） 二．培养基的准备（中性，PH6.5-6.8）