发布时间 : 星期四 文章Nanodrop分光光度计20002000C中文操作使用说明 - 图文更新完毕开始阅读710507c8ec3a87c24028c453
光谱显示了当前样本在1nm光程下的数据，光程信息显示在Y轴。 右侧的光谱显示栏包括下列部分：
Sample ID－输入样品名称的区域。应在样品检测前输入样品名称。
Type－用户可以在下拉菜单中选择检测的核酸类型。选项包括：DNA-50用 于检测DNA，RNA-40用于检测RNA，ssDNA-33用于检测单链DNA，其他选 项还有Oligo DNA和Oligo RNA，可以根据不同的序列使用合适的消光系数。 Custom选项可以输入消光系数的范围是15－150。
Conc－使用特定的消光系数和260nm波长下的吸光值来计算浓度。浓度单位 可以在下拉框中选择。使用Beer定律来计算核酸浓度，可以参考“Nucleic Acid Calculations”。
A260－显示校准到10mm光程下的260nm波长下的吸光值。
注意：显示的A260值并不同于样品在260nm下的吸光值（以750nm波长为参比波 长）。A260值在计算核酸浓度时考虑到染料对吸光值的影响，采用染料校准因 子对检测结果进行了校准，吸光值校准采用选择的校准波长和750nm基线。从而 显示的A260值和用来计算的核酸浓度的吸光值不一样。
260/280－260和280nm吸光值的比值。这个比值用来判定DNA和RNA的纯度。 对于DNA来说比值为1.8时认为是纯的DNA，对于RNA来说比值为2.0时认为 是纯的RNA。如果比值偏低，表明核酸中存在蛋白，酚或其他在280nm 处 有吸光的杂质。
Dye1（2）：选择染料，默认的选择是：染料1（Cy3），染料2（Cy5）。 Abs－每个染料在1mm光程下的吸光值。
pmol/ul－基于每个荧光染料的消光系数计算出来的浓度，可以在下拉框 中选择浓度单位。
Analysis correction－在计算浓度前，减去参比波长下的吸光值。这仅仅影响 报告的核酸浓度，默认的参比波长为340nm。
注意：对所有可见光检测，软件的校准波长为750nm，并自动以400nm和750nm 吸光值为基线进行染料浓度计算。
进行微阵列检测
1．在主菜单中选择Micro Array功能，如果显示了波长确认窗口，确保检测臂放 下，并点击OK。
2．选择检测样品的类型，默认的设定为ssDNA-33。 3．在下列框中选择浓度单位，默认的单位是ng/ul.
4．使用染料1或者染料2后面的下拉框来选择染料，默认的染料设定：染料1
（Cy3），染料2（Cy5），如果仅标记了一个染料，在染料2类型上选择None。 5．默认以340nm的吸光值为核酸校准值。通过取消选择Analysis correction框来 选择或者不选择参比波长校准。 在文件下拉条中选择Use current settings as default，这是一个便捷的方法来限 定每个心工作薄的设定时间。
6．选择Add to report来自动把当前检测的结果添加到报告中去。默认的设定是 把所有的报告添加到报告中。为了把一个检测结果保存到工作薄中，必须在 检测前把Add to report选择上。
7．选择Overlay spectra 来同时显示多个光谱图。 8．使用合适的buffer来检测空白对照：
基座模式：取1－2ul空白溶液加到基座上，放下检测臂并点击Blank。 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶 液，按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。 注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从 仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位置。
9．输入样品名称，按做空白一样加入样品点击Measure开始检测。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测以后：
用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测 了。
当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检 测。 Oligo Calc
Oligo Calc软件功能可以用来计算特定核酸序列的分子量，消光系数，浓度因子 和熔点。选择这个任务栏：
Oligo Calc－用来输入感兴趣的序列并选择合适的样品类型。
Melting Point－显示了DNA链计算的熔点，这个功能只有在DNA序列上有 效。 要使用Oligo Calc：
1．使用下列的方法来输入碱基序列：
碱基序列显示框下面的按键。
键盘（仅使用A，C，G，T和U来输入序列） 复制和粘贴序列。
要清楚碱基序列，点击显示框右边的Clear键。单个碱基可以使用手动来删除。 2．选择磷酸化程度，可以选择：单磷酸化（DNA），单，双或者三磷酸化（RNA）. 3．可以选择双链，在计算时可以自动包含其互补的链序列。 4．在下列菜单中，选择分析的核酸类型，默认的为DNA。 5．对于额外的碱基序列，选择Modification并输入分子量。 Oligo Calc试验结果区域包括：
分子量－显示计算的碱基序列的分子量。
消光系数－显示260nm 处的消光系数，单位ng-cm/ul。 浓度因子－恒数，基于消光系数来计算检测序列的浓度。 碱基数－显示输入了多少个碱基。 %GC－显示序列的GC含量。
要计算DNA序列的熔点：
1．按上面描述的方法输入序列。
注意：如果一个碱基序列已经输入到Oligo Calc中，熔点框的碱基序列框将自动 输入那个序列。
2．在每个框中输入合适的的数据：
Oligo Molarity－输入样品的摩尔浓度，默认的值为10uM，可以针对样品 更改为更合适的数据。
Cation Molarity－输入样品的阳离子浓度，默认的值为50mM，可以针对 样品更改为更合适的数据。
％Formamide－输入样品中的甲酰氨浓度，默认的值为0，可以针对样品 更改为更合适的数据。
熔点分析结果包括：
Salt-Adjusted－计算序列的熔点而不考虑相邻碱基序列的干扰。 Nearest-Neighbor－显示序列的熔点同时考虑相邻碱基序列的干扰。
UV-VIS
总论
UV-VIS功能使NanoDrop 2000/2000c可以想普通的紫外-可见分光光度计一样行 使功能。可以显示从190到840nm的样品的吸光值。最多可以同时指定检测40个 波长下的吸光值并把数据显示在报告中。
检测浓度范围
在使用自动光程模式下，NanoDrop 2000/2000c能够检测相当于10mm光程下300A 的吸光值。
独特的屏幕特征
右侧栏显示UV-VIS独有的特征，左侧任务栏的说明参见“Software Overview”。
光谱图显示了当前样品校准到1mm光程下的吸光值，光程信息显示在Y轴上。 光谱图的右侧，包括下列内容：
Sample ID－输入样品名称区域，在检测样品前应输入样品名称。
Auto Pathlendth－在检测高浓度样品时自动调整合适的光程。如果选择了这 个功能，在220nm到840nm间任何波长下的吸光值为1.25左右时，检测使用短 的光程。对于波长在190nm到219nm范围内，1mm光程下的吸光值为1.0左右 时改为短光程检测。
短光程对于高浓度样品检测是非常有用的。虽然这个功能对其他应用是自 动进行的，在UV-VIS功能下，用户可以选择自动光程功能或者限定基座检 测光程为1mm。在其他情况下，吸光值数据将显示为1mm光程下的数据。 基线校准－自动设定基线，样品检测的数据以基线的数据为参考。默认的波 长为750nm，如果不使用基线校准，光谱可能会发生基线偏移。
添加波长－在版面上添加指示波长和指示吸光值。当一个样品被检测，把鼠 标十字号指示移动到感兴趣的波长并点击添加波长，或者可以在选择区域输