实验七 食品中还原糖的测定(综合性) 联系客服

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3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000 mL容量瓶中,加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL,再加入45 g丙三醇,摇匀,冷却后定容至1000 mL。 三、操作步骤

1. 制作葡萄糖标准曲线

取7支20 mL具塞刻度试管编号,按表1分别加入浓度为1 mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。

表1 葡萄糖标准曲线制作

管 号 0 1 2 3 4 5 6

1mg/mL葡萄糖标准液

(mL)

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

蒸馏水(mL) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8

DNS(mL)

1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5

葡萄糖含量(mg)

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

光密度值 (OD540nm)

将各管摇匀,在沸水浴中准确加热5 min,取出,用冷水迅速冷却至室温,用蒸馏水定容至20 mL,加塞后颠倒混匀。调分光光度计波长至540 nm,用0号管调零点,等后面7~10号管准备好后,测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线。

2. 样品中还原糖的测定 (1)还原糖的提取

准确称取3.00 g食用面粉,放入100 mL烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入50 mL蒸馏水,搅匀,置于50 ℃恒温水浴中保温20 min,不时搅拌,使还原糖浸出。过滤,将滤液全部收集在100 mL的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液。 (2)显色和比色

取2支20 mL具塞刻度试管,编号,按表2所示分别加入待测液和显色剂,将各管摇匀,在沸水浴中准确加热5 min,取出,冷水迅速冷却至室温,用蒸馏水定容至20 mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长540 nm,用0号管调零点,测出7~8号管的光密度值。

表2 样品还原糖测定

管 号 7 8

还原糖待测液(mL)

0.5 0.5

蒸馏水(mL) 1.5 1.5

DNS光密度值查曲线葡萄(mL) (OD540nm) 糖量(mg) 1.5 1.5

平均值

四、结果与计算

计算出7、8号管光密度值的平均值,在标准曲线上分别查出相应的葡萄糖毫克数,按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量(以葡萄糖计)。

还原糖(%)= 五、注意

1. 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色,并使用同一空白调零点和比色。 2. 面粉中还原糖含量较少,计算总糖时可将其合并入多糖一起考虑。 注:实验分组情况

本实验每班学生为36人,分成6组,每组6人。

查曲线所得葡萄糖毫克数×

提取液总体积 测定时取用体积

×100 =

样品毫克数