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山东师范大学本科毕业论文
建模最常用和最有效的方法之一就是多元线性回归方法。对于非线性体系可作适当处理化为线性形式。设有m个因素影响指标取值，通过n次量测试验，得到n组试验数据。假设指标与因素之间的关系可用线性模型表示，则有应用均匀设计一节中的方法将上式写成矩阵式或简记为式中表示第k次试验中第i个因素的水平值；为建立模型时待估计的第个参数；为第次试验的量测响应（指标）值；为第次量测时的误差。应用最小二乘法即可求出模型参数矩阵B如下将B阵代入原假设的回归方程，就可得到响应关于各因素水平的数学模型，进而可以图形方式绘出响应与因素的关系图。
模型中如果只有一个因素（或自变量），响应（曲）面是二维空间中的一条曲线；当有二个因素时，响应面是三维空间中的曲面。在化学量测实践中，一般不考虑三因素及三因素以上间的交互作用，有理由设二因素响应（曲）面的数学模型为二次多项式模型，可表示如下：通过n次量测试验（试验次数应大于参数个数，一般认为至少应是它的3倍），以最小二乘法估计模型各参数，从而建立模型；求出模型后，以两因素水平为X坐标和y坐标，以相应的由上式计算的响应为Z坐标作出三维空间的曲面（这就是2因素响应曲面）[9-16]。 1.5 PMP柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成
单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。己有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。在单糖分析方法中气相色谱法分离单糖繁琐费时,容易出现色谱峰异构化裂分,而且不能直接得到糖醛酸的信息。高效液相色谱测定单糖[17]的方法,常见的有糖分析柱还有氨基键合相柱[18],这些柱子的商品售价非常贵,导致测试成本也水涨船高。
1-苯基-3-甲基-5-毗吟琳酮(PMP)柱前衍生化HPLC[19]法,现在已经被很多领域使用,它对单糖含量检测很有效,1-苯基-3-甲基-5-毗吟琳酮是用于还原性糖的比较适宜的衍生化试剂,PMP引入糖结构,可以使原来没有UV吸收的糖分子式中在245-25Onm范围里,有非常显著的UV吸收信号,而且它的产物比较稳定,也不会生成异构体干扰测定。本实验采用1-苯基-3-甲基-5-毗吟琳酮衍生化法,配合DADUV区检测器以及C18色谱柱,来全面详细分析木霉粗多糖的单糖组成测定,并达到快速准确,高灵敏度,操作方便安全为目标。 1.6 实验目的和意义
木霉作为环境友好型植病生防真菌，能有效防治作物病害，促进植物生长、
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诱导植物产生抗性，在农业和环境保护领域具有重大应用前景。但是我国对于绿色木霉的基础研究报道并不多，研究多集中在纤维素酶活性和生物防治方面，目前国内外对木霉菌在增强植物耐盐性及其作用机理方面缺乏系统研究[20]。
本次实验通过将哈茨木霉菌丝干料最大程度的水解，摸索出最佳多糖提取条件，如：温度、取样时间以及料水比。然后利用PMP柱前衍生高效液相色谱法对木霉做了单糖成分分析，也对进一步盐胁迫等条件下木霉提取物的改变提供了实验依据。
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2.多糖提取
2.1实验材料
本实验所用的材料的是山东省科学院生物所制备提取的木霉菌丝干样。 2.2 实验试剂
马铃薯葡萄糖水（GB标准）（青岛高科园海博生物技术有限公司）； 乙醇（无水乙醇）（莱阳经济技术开发区精细化工厂） 2.3 实验仪器
JSP-350A 高压多功能粉碎机（浙江省永康市金穗机械制造厂）； FA1004N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；
YXQ-LS-60 SII 立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）； 数显恒温水浴锅（HH-3A）（国华电器有限公司）； Julabo F12电热恒温浴锅； KONKA电磁炉； Panasonic速冻冰箱；
HITACHI高速冷冻离心机（CR22GIII）；
全温振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）； Mini Vortex涡旋振荡器；
SHZ-D（III）循环水式多用真空泵（上海予华仪器有限公司）； 磁力搅拌器； 1000μL移液枪； 无菌超净工作台；
DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司） 2.4 单因素实验 2.4.1配制PDA培养液
1）准确称量93.6克马铃薯葡萄糖水于5L锥形瓶中，放入转子，先加入1L去离子水后轻轻摇匀，再继续加入2.6升去离子水，混匀。 2）将溶液分装入24个500ml锥形瓶中，各加入150ml。 3）依次用干净纱布和报纸封口。
4）将24个锥形瓶放入高温灭菌锅中，115℃，灭菌20分钟。
5）取出冷却后，接菌（将菌液稀释至10^7cfu/ml,每瓶中各加入1ml）。放入
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摇床中，培养2天。 2.4.2 制得样品
1）将溶液用量筒分装到4个离心瓶中，离心机中10000g转速下离心10分钟。 2）取出后依次抽滤，得滤饼，放于称量纸上，烘箱中75℃下烘干3小时。 3）将样品用粉碎机磨碎成细粉状，并称重。 2.4.3 单因素实验—温度
1）在5个100ml小烧杯中称取样品各1.0g，然后按照1：40的料水比，各加入40ml去离子水，搅拌均匀，并用保鲜膜封口。
2）分别放于60℃、70℃、80℃、90℃、100℃水浴锅中加热。保温10分钟后开始计时。水浴加热2h，每隔10min搅拌一次。
3）取出后分别抽滤，取滤液（约为40ml）,加热浓缩至约10ml。
4）常温下冷却，在每个烧杯中各加入40ml无水乙醇并搅拌使其混合均匀，静置，放于4℃冰箱中，过夜。
5）次日取出抽滤，将滤饼连同滤纸一起放于75℃烘箱中烘干2h后，取出称量，记录质量。对比并取最大质量的温度。 2.4.4单因素实验——取样时间
1）在5个100ml小烧杯中称取样品各1.0g，然后按照1：40的料水比，各加入40ml去离子水，搅拌均匀，并用保鲜膜封口。
2）将5个烧杯都放于90℃水浴中加热，加热时间分别为30、60、90、120、150分钟。每隔10min搅拌一次。
3）取出后分别抽滤，取滤液（约为40ml）,加热浓缩至约10ml。
4）常温下冷却，在每个烧杯中各加入40ml无水乙醇并搅拌使其混合均匀，静置，放于4℃冰箱中，过夜。
5）次日取出抽滤，将滤饼连同滤纸一起放于75℃烘箱中烘干2h后，取出称量，记录质量。对比并取最大质量的温度。
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