发布时间 : 星期一 文章巴氏小体染色观察更新完毕开始阅读4c96e3421fd9ad51f01dc281e53a580216fc5095
一、 实验目的
1. 掌握人体性染色质的检测方法；
2. 观察人体性染色质的形态特征及存在部位，为进一步研究人体染色体的畸变
与疾病提供参考条件；
3. 了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制。 二、
实验原理
人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。女性为XX，男性为XY。X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。Y染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，这是由于剂量补偿效应导致的。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)
定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。1949年M.L.Barr等研究发现雌猫神经元细胞核膜内有凝缩的深染小体，而雄性个体细胞中则没有，这一结构被称为巴氏小体(Barrbody)。进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中X染色质随机失活形成的，在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),贴近于核膜边缘的染色小体。 三、
实验材料
1. 器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，牙签等。 2. 试剂：硫堇染液，1M HCl，蒸馏水、生理盐水。 3. 材料：口腔上皮细胞。 四、 1. 2. 3. 4. 5. 6. 五、
实验结果 实验步骤
取口腔上皮细胞或毛囊细胞并涂于干净的载玻片上，自然干燥5-10min； 1M HCl水解3-5min； 水洗3次，每次1min； 硫堇染色20min；
水洗去染料，显微镜观察；
若染色过深或有大量染料结晶，可用95%乙醇分色3-5sec，水洗去酒精，镜检。
A
图 1 人类巴氏小体的染色观察结果
B
六、 实验分析
哺乳动物 X 染色体连锁基因的剂量平衡, 是通过雌性胚胎发育早期随机或印记失活一条 X 染色体来实现的。剂量补偿是使 X 连锁基因的转录水平在不同性别之间达到平衡的过程。性别决定过程在分子水平上体现为一系列基因的表达调控。在生物界中, 性别决定的机制( 包括剂量补偿) 有很多种, X 染色体失活是哺乳动物实现剂量补偿的方式。X 染色体失活对基因表达进行调控的特殊性在于它调节的不是基因或基因簇, 而是一整条染色体。X 染色体的失活首先涉及一种计数和选择机制, 指导特定条件下哪条 X 染色体失活, 对成年细胞二倍体而言失活 X 染色体的数量遵循 N 一 1 规则(N 为染色体数)。为了保持 X 染色体的数目与男性的相同，故女性细胞在发育过程中将一条 X 染色体失活，即固缩为 X 染色质小体。
所以通过巴氏小体检查可确定胎儿性别和查出性染色体异常的患者，如克氏综合征患者外貌为男性，但有一个巴氏小体，可判定患者的核型是 47，XXY；而外表为女性的特纳氏综合征患者却无巴氏小体，故判断患者的核型是 45，XO。其他性染色体异常的患者如 XXY、XXYY 有 1个巴氏小体，而 XXX、XXXY 有 2 个巴氏小体等。
X 失活在胚胎发育的早期把一整条染色体给关闭了, 但是仍然有一些 X 连锁基因逃避了 X 失活, 它们在失活和不失活的 X 上都表达。上述 XIST 即是逃避 X 失活的基因之一。迄今已发现 12 种以上的基因逃避 X 失活。