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简
答：RNAi是外源或内源性的双链RNA
答题
6．为什么利用RNAi抑制一个基因的表达较利用反义RNA技术更为彻底。
进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解.dsRNA
进入细胞后，在Dicer作用下，分解为21－22bp的结合相关酶，形成RNA介导的沉默复合物在ATP作用下，将双链SiRNA变成单链SiRNA,进而成为有活性的RISC,又称为与靶mRNA结合，导致其断裂，进而导致其彻底降解。
反义RNA是与靶mRNA互补的RNA，它通过与靶mRNA特异结合而抑制其翻译表达，反义RNA是与靶mRNA是随机碰撞并通过碱基互补配对，所以，mRNA不一定完全被抑制。
8．简述真核基因表达的调控机制。
答：（1）DNA和染色质结构对转录的调控：
①DNA甲基化，②组蛋白对基因表达的抑制，③染色质结构对基因表达的调控作用，④基因重排，⑤染色质的丢失，⑥基因扩增； （2）转录起始调控： ①反式作用因子活性调节，包括表达调节、共价调节，配体调节等蛋白质相互作用调节），
②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控； （3）转录后调控：
①5’端加帽和3’端多核苷酸化调控，②选择剪接调控，③mRNA运输调控，④mRNA稳定性调控；
（4）翻译起始的调控：
①阻遏蛋白的调控，②对翻译因子的调控，③对AUG的调控，④mRNA 5’端非编码区的调控，⑤小分子RNA； （5）翻译后加工调控：
①新生肽链的水解，②肽链中氨基酸的共价修饰，③信号肽调控。
9．简述mRNA加工过程。
答：（1）5′端加帽（由加帽酶催化5′端加入7-甲苷乌苷酸，形成帽子结构m7GpppmNP-）。 （2）3′
端加入Poly(A)尾（A、组蛋白的成熟mRNA无需加polyA尾；B、加尾信号包
括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切过程需要多种蛋白质因子的辅助）。 （3）mRNA前体的剪接（剪接加工以除去内含子序列，并将外显子序列连接成为成熟的有功能的
mRNA分子。内含子两端的结构通常是5′-GU……AG-3′。选择性剪接的作用机制包括；A使用不同的剪接位点，B选择使用外显子，C、反式剪接，D、使用不同的启动子，E、使用不同的多腺苷酸化位点）。
（4）RNA的编辑（发生于转录后水平，改编mRNA序列，C→U或A→G，增加遗传信息容量）。 10．简述生物的中心法则。
答：中心法则(genetic central dogma)，是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，
即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。
11．简述真核生物基因结构及特点。
答：真核细胞的基因也是由和两部分组成的；
（1）编码区：
——能的序列。
特点：间隔的、不连续的。即能编码蛋白质的序列被不能编码蛋白质的序列分隔开来，成为一种断裂的形式不能编码蛋白质的序。 ——列。
（2）非编码区： 有调控作用的核苷酸序列。
——是中位于编码区上游的核苷酸序列，是RNA聚合酶结合点，能准确地识别的并开始转录，
有调控遗传信息表达的作用。
12．简述SNP的特点，SNP如何发挥生物学作用的及研究SNP的意义。
答：特点：
(1)数量多，遍布基因组，分布相对平均，据统计，人类群体中大概有1100万个SNP，约每300bp就有1个SNP位点，方便挑选位点。 (2)虽有A/C/G/T四种核苷酸，但SNP位点大多是双态，即每个位点在群体中只存在2种核苷酸形式，因此A/C、A/G、A/T、C/G、C/T、G/T、Indel等几种形态，适合开展大规模、高通量、自动分化的检测。
(3)人类基因组90%的变异形式为SNP，SNP的遗传很稳定——每一代之间不会有太大变化。 SNP的研究意义：
虽然人类99%以上的DNA序列是相同的，但DNA序列的变化能对人类对疾病、环境攻击（比如细菌、病毒、毒素和化学物质)、药物和治疗的反应产生重大影响。这就使得SNP对生物医学的研究和药物开发、医学诊断的发展有重要意义。SNPs可作为遗传作图研究中的遗传标记，帮助定位和鉴定功能基因。研究者相信SNP图谱将帮助他们认识复杂的多基因疾病，如癌症，糖尿病，血管性疾病和某些精神性疾病。
13．简述miRNA的结构特点和生物功能。 答：广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，它本身不具有开放阅读框架(ORF);
通常的长度为20～24nt，但在3′端可以有1～2个碱基的长度变化；成熟的miRNA5′端有一磷酸基团，3′端为羟基,这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来；多数miRNA还具有高度保守性、时序性和组织特异性。
miRNA执行一定的生物学功能：对与其互补的mRNA表达水平具有调节作用；一些偏大的miRNA可能参与了基因组的重组装（27nt）。
14．什么是DNA甲基化? 简要说明甲基化的检测方法及其生物学效应。
答：胞嘧啶和甲基在甲基化酶的作用下形成5’-甲基胞嘧啶的过程叫做DNA的甲基化。DNA甲基化抑
制或降低转录水平，在基因转录起始点附近，有高度密集的CpG重复序列，被称为CpG岛，或HTF岛。推测该序列与基因转录活性有关。
检测方法：①酶切鉴定：HpaⅡ只能切割未甲基化的-CCGG-，HpaⅡ如果第二个C被甲基化了就不能
切割。MspⅠ能够识别和切割甲基化或未甲基化-CCGG-。比较这两种酶切割DNA产生的DNA片段的差异，可知DNA片段甲基化的程度与有无。②限制性内切酶＋Southernbloting；③甲基化特异性PCR（MSP）；④亚硫酸盐变性后测序；⑤甲基化敏感性单核苷酸引物扩增（Ms-SnuPE）；⑥甲基化荧光检测；⑦亚硫酸氢钠变性后限制酶分析（COBRA）；⑧差异甲基化杂交（DMN）；⑨酶的区域性甲基化分析（ERMA）。
15．何为顺式作用元件？请举出三种真核生物基因的顺式作用元件。
答：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列，组成基因转录的调控区。例：启动子：转录调节蛋
白和RNA聚合酶的结合位点；增强子：是一个有增强转录的顺式作用元件，能够提高一些真核生物启动子的效率，并能能在启动子的任何方向和任何位置(上游或下游)作用。沉默子:负性调节元件,当其结合特意蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。
16．以trp操纵元为例简述衰减子的调控机制。
答：当细胞中有色氨酸存在时,核糖体能够顺利翻译出整个前导肽而在终止密码子处停下来。这时，
核糖体占据了序列1和部分序列2，使序列2和序列3不能产生有效的配对，因而序列3和序列4配对产生终止子的发夹结构，于是实现转录的终止。当出现Trp饥饿时，核糖体停顿在两个Trp密码子上，这时，核糖体占据了序列1而留下完整的序列2以便与转录出的或即将转录出的序列3形成二级结构。这样，当序列4转录出来后仍然是单链状态，即终止子不能形成，于是转录继续进行下去。
23．在基因转录水平的表达调控方式上,真核生物往往采用正控制系统,而原核生物却往往采用负控制系统，请简要阐明其原因。
答：这两种调控方式是长期自然选择的结果，也是生物体采用的经济有效的原则选择的。原核生物
基因组小，基因少而简单，生命繁殖快，多采用负控制的保险机制，即使调节蛋白质失活，酶系统照样合成，只不过有时浪费一点罢了，绝不会使细胞因缺乏该酶系统而造成致命的后果。另外，采用负控制具有一开俱开，一关俱关的特点，减少不必要的环节；而真核生物基因组大，基因多
且复杂，采用正控制具有更大的优越性，转录因子相互作用缺一不可，可以保证真核生物基因表达调控的严谨性和灵活性以及经济性原则。
24．根据你的理解说明利用”酵母双杂交系统”研究蛋白质间相互作用的原理。
答:真核生物的转录因子可以分为两部分，BindingDomain和ActivatedDomain。BindingDomain负责结合在DNA上，ActivatedDomain负责激活转录。二者都是相互独立的区域，但二者单独时都不能有转录活性，必须结合在一起或相互靠近在一起才有活性。
在研究蛋白质相互作用中，将一种蛋白质的基因连接在BindingDomain上，将另一种蛋白质的基因结合在BindingDomain上，蛋白质基因表达后就与转录因子的两个Domain分别结合，两个蛋白质因相互作用而结合在一起，进而使BindingDomain和ActivatedDomain相互靠近在一起，从而形成具有转录活性的转录因子。在欲表达的基因区域连上报告基因，通过报告基因的表达与否，就可判断蛋白质之间是否发生了相互作用。
25．举三例RNA的研究成就及其在推动分子生物学发展中的重要意义。
答：Ribozyme：拓展了酶的概念、内含子自我剪切、生命起源和分子进化。
Antisense-RNA：基因表达调控、基因工程。 RNAi：基因表达调控、功能基因组学。
26．简要阐明中心法则的提出对分子生物学研究的理论意义和指导作用。
答：中心法则体现了遗传信息的唯一性、遗传物质的自决性、信息表达的单程性、序列转换的共线
性，为分子生物学研究提供了一个理论框架，分子生物学是一部从DNA到蛋白质的中心法则的演绎。
中心法则面临的挑战：
反转录酶、内含子、不连续转录、非翻译序列、伴刀豆球蛋白A肽链一级结构的重排、RNA变通性剪切、RNA编辑、以蛋白质为模板的肽链合成、朊病毒的发现。 中心法则的修正：
从DNA到RNA到肽链不断有新的遗传信息的加入： DNA：重排
RNA：反转录、不连续转录、多种方式剪切、编辑 mRNA：跳跃翻译、折叠
肽链：氨基酸重排、蛋白质内含子剪切 朊病毒复制
27．比较两种mRNA的剪切方式的异同。
答：Cis-splicing与Trans-splicing的比较 Cis-splicing 以一条pre-mRNA为底物 在splicesome中完成 组成型剪接 选择型剪接 Lariatintron 29．4种基因表达调控类型的区分： 答：正、负调控：调节蛋白缺乏时对操纵子的影响；
可诱导、阻遏：操纵子对调节基因表达的小分子所作出反应的特点；
有或无Glu调节cAMP-CAP活性的分子生物学机制：
Glu代谢物抑制腺苷环化酶、促进磷酸二酯酶调节细胞中cAMP的水平。
当缺乏Glu时，生物体内ATP环化酶会使ATP变成cAMP，cAMP与CAP蛋白结
Trans-splicing 以两条不同来源的pre-mRNA为底物 在splicesome中完成 在成熟RNA的前导序列中拼接一个外来的35Nt的剪接前导序列或微小外显子或发生在两条pre-mRNA间的选择型剪接 Y-intron 合，进入操纵元上CAP位点，此时RNA聚合酶才能进入结合位点开始转录。 如果不缺乏Glu的情况下，无法生成cAMP，也就无法形成复合物，也不能使RNA 聚合酶进入结合位点，开始转录。
32．何谓RNA剪接，何谓RNA编辑？
答：RNA剪接：从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个
连续的RNA分子的过程。
RNA编辑(RNAediting)：RNA编辑是指在mRNA水平上改变遗传信息的过程。RNA编辑是通过比较
成熟的mRNA与相应基因的编码信息时发现的，成熟的mRNA序列中有几种意想不到的变化，包括U→C，C→U；U的插入或缺失、多个G或C的插入等。
33．什么是正调控与负调控，试举例说明。
答：正调控系统和负调控系统是按照没有蛋白质存在的情况下操纵元对新加入的调节蛋白的响应情
况来定义的。在没有调节蛋白质存在时基因是表达的，加入这种调节蛋白后基因表达活性便关闭。这样的控制系统就叫做负调控系统。如大肠杆菌色氨酸操纵子的调控。相反，如果在没有调节蛋白存在时基因是关闭的，加入这种调节蛋白后基因活性就被开启，这样的控制系统叫做正调控系统。如cAMP-CAP对于乳糖操纵元的正调控。
34． 简述空转反应的形成及其结果。
答：当无负载的tRNA进入核糖体A位以后，无法形成新的肽键，而ATP却在不断的消耗，这就是所
谓的空转反应。细胞内出现空转反应时，就会发出一种报警信号，这就是鸟苷5’二磷酸3’二磷酸（pppGpp）。ppGpp和pppGpp能通过某种方式控制细胞的许多生理过程，以使细胞能够适应有限的营养条件，特别是氨基酸的供应。这些非同寻常的代谢产物能够影响某些蛋白质和酶的活性或性质，从而设法解决细胞所碰到的问题。
35．简述突变热点的定义及其可能的机制。
答：从理论上讲，DNA分子上每一个碱基都能发生突变，但实际上突变位点并非完全随机分布，而
是某些位点的突变频率大大高于平均数，这些位点就称为突变热点。形成突变热点的最主要的原因是5-甲基胞嘧啶的存在。5-甲基胞嘧啶和C一样，在突变剂的作用之下，会产生脱氨基氧化。5-甲基胞嘧啶脱氨基化以后生成T，而T是DNA的正常组分，形成G-T的不配对状态。形成突变热点还有其他原因。在短的连续重复序列处容易发生插入或缺失突变。突变热点还与突变剂有关。使用不同的突变剂时出现的突变热点处不同。
36．简述同源重组的机理。
答：同源重组发生在DNA同源序列之间，大肠杆菌的同源重组需RecA蛋白，以Holliday为例说明同
源重组的机理：①切断：同源联会的两个DNA分子中任意一个出现单链切口，切口由某些DNA内切酶产生。②链置换：切口处形成的5’端局部解链，由细胞内类似于大肠菌聚合酶Ⅰ的酶系统利用切口处的3’OH合成新链，而把原有的链逐步置换出来，使之成为游离的以5’P为末端的单链区段，单链反应可以一直进行下去，由此产生的单链区段越来越长。③单链侵入：由置换产生的单链区段侵入到参与联会的另一条DNA分子因局部解链而产生的单链中。④loop切除：侵入的单链DNA与参与联会的另一条DNA分子中的互补链形成碱基配对，同时把侵入单链的同源链置换出来，由此产生D-loop。⑤链同化：loop切除中产生的3’OH断头和侵入单链的5’P由DNA连接酶共价连接。⑥异构化：链同化进行过程中，DNA经过一定的扭曲形成异构体。⑦分支迁移：两条DNA分子之间形成的交叉可以沿DNA移动，这一过程叫分支迁移。
39．请解释核苷酸的C值悖论及其原因。
答：最大C值（单倍体基因组的总DNA含量）；最小C值（-编码基因信息的总DNA含量）。生物体
进化程度与最大C值不成明显正相关；亲缘关系相近的生物间最大C值相差较大；一种生物内最大C值与最小C值相差极大。
原因有：重叠基因、重复基因、间隔基因、跳跃基因、假基因。