发布时间 : 星期一 文章2019-2020瀛﹀勾浜烘暀鐗堢敓鐗╅�変慨涓�璁蹭箟锛氫笓棰? 璇鹃1 寰敓鐗╃殑瀹為獙瀹ゅ煿鍏? - 鐧惧害鏂囧簱更新完毕开始阅读38978f65a1116c175f0e7cd184254b35effd1a64
课题1 微生物的实验室培养
学习目标：1.知道培养基的种类、营养要素及配制原则。(重点) 2.掌握消毒、灭菌的原理和方法。(重点) 3.学会配制培养基和纯化大肠杆菌的方法。(重、难点)
1．培养基
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)种类：
液体培养基：配制成的液体状态的基质
??（加入凝固剂，如琼脂）
按物理性质分?
??固体培养基：配制成的固体状态的基质
(3)营养组成：各种培养基一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等)以及氧气的要求。
2．无菌技术
(1)无菌技术的目的是防止外来杂菌的入侵。主要内容包括： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 (2)消毒和灭菌： 消毒 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体概念 使用较为温和的物理或化学方法杀
死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 常用煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 方法 剂消毒法、紫外线消毒法 适用对象 操作空间、操作者双手等 3.大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
?最常用的细菌培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基①?
→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板?配制步骤：计算―
②培养基应采用高压蒸汽灭菌；倒平板时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行，等平板冷凝后将平板倒置。
(2)纯化大肠杆菌
①纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。
②纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
ⅰ平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
ⅱ释释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
③培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。
④菌种保存：
适用对象 培养基类型 温度 方法 临时保藏法 频繁使用的菌种 固体斜面培养基 4 ℃ 甘油管藏法 长期保存的菌种 液体培养基 －20 ℃ 菌落长成后放入冰箱中保存，将培养的菌液与等体积灭菌后
以后每3～6个月将菌种从旧的甘油混合均匀后放在冷冻箱的培养基上转移到新鲜的培养内保存 基上 缺点 菌种易被污染或产生变异
1．判断对错
(1)高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖。
( )
(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。( ) (3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。
( ) 提示：(1)× 在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。
(2)× 倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。
(3)× 接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。 2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( ) A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
C [制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，应先根据需要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。]
[合作交流] 1．虽然各种培养基的具体配方不同，但是一般都含有哪些成分？
提示：虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源、无
培养基及无菌技术 机盐和生长因子。另外，还必须满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2．对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么？
提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。
3．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
提示：无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。 [归纳总结]
1．培养基的配制原则
(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。
(3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用磷酸氢二钾－磷酸二氢钾。
2．培养基的成分及功能 营养物质 作用 功能 主要来源 无机碳源：CO2、能为微生物代谢提供碳元素 构成生物体的细胞物质和NaHCO3等；有机碳源 一些代谢产物，有些是异养碳源：糖类、脂肪生物的能源物质 酸、花生粉饼、石油等 无机化合物：N2、能为微生物的氮源 代谢提供氮元素 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 是生长必不可少的 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等