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化验室操作指导书（受控） 16 上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面上，36±1℃的培养18-24h。
7.4 将斜面培养物移种到下列培养基进行生化试验。
7.4.1 色氨酸肉汤：在36±1℃的培养24±2h后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml，上层出现红色为靛基质阳性反应。
7.4.2 MR-VP培养基：在36±1℃的培养48±2h后。以无菌操作移取培养物1ml至13mm*100mm试管中，加5％α-萘酚乙醇溶液0.6ml，40％氢氧化钾溶液0.2ml和少许肌酸结晶，振摇试管后静置2h，如出现伊红色，为VP试验阳性。
将 MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。如培养物变红色，为甲基红试验阳性，若变黄色则为阴性反应。
7.4.3 Korser氏枸掾酸盐肉汤：于36±1℃的培养96h记录有无生长。 7.4.4 LST肉汤：于36±1℃的培养48±2h，观察试管中是否产气。
7.4.5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。 7.4.6 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下
靛基质 + - + - - + MR + + + + - - VP - - - - + + 枸掾酸盐 - - + + + + 鉴定（型别） 典型大肠杆菌 非典型大肠杆菌 典型中间型 非典型中间型 典型产气肠杆菌 非典型产气肠杆菌 如出现上表以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。
7.5 结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为++--或-+--，再根据LST肉汤阳性管数查MPN表，报告每克（毫升）样品中大肠杆菌MPN值。 注：本文参照SN0169-92《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》
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化验室操作指导书（受控） 17 （六）沙门氏菌检验
1 主题内容与适用范围
本文规定了食品中沙门氏菌的检验方法。 本文适用于航空食品的检验。 2 设备和材料
吸管（1ml、10ml）、恒温培养箱（36±1℃、42℃）、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等 3 培养基和试剂
缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋琼脂(BS)、DHL琼脂、HE琼脂、WS琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、糖发酵管、ONPG培养基、半固体琼脂、丙二酸钠培养基、沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型。 4 检验程序
沙门氏菌检验程序如下：
检样25g+225mlBP胨水 36±1℃ 4h
10ml匀液+MM(或TTB)100ml 10ml匀液+SC100ml 42℃ 18-24h 36±1℃ 18-24h
BS DHL 36±1℃ 40-48h 36±1℃ 18-24h
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化验室操作指导书（受控） 18 挑取可疑菌落 H2S + 靛基质-尿素- KCN- H2S + 靛基质+尿素- KCN- 赖氨酸+ H2S - 靛基质-尿素- KCN- 赖氨酸+/- 非如左述的各种反应结果 TSI（斜面、底层、产气、H2S），蛋白胨水（），尿素（PH7.2），KCN, 赖氨酸 赖氨酸+ 甘露醇、山梨醇 ONPG 报告 沙门氏菌 血清学试验 沙门氏菌 血清学试验 非沙门氏菌 非沙门氏菌 5 操作步骤 5.1 前增菌
取检样25g，加入225mL缓冲蛋白胨水于均质杯内。用均质器以8000～10000r/min打碎1min，于36±1℃培养4h(干蛋品培养18～24h)，移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液（MM）或四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液内，于42℃培养18～24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸（SC）增菌液内，于36±1℃培养18～24h。 5.2 分离
取增菌液1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36±1℃分别培养18～24h(DHL)或40～48h(BS)，观察各
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化验室操作指导书（受控） 19 个平板上生长的菌落，沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ在各个平板上的菌落特征见表1。
表1 沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 BS琼脂 沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ 灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株不产硫化氢，形成灰绿色的菌落周围培养基不变 DHL琼脂 无色半透明；产硫化氢菌落中心带黑色或几乳糖迟缓阳性或阴性的菌株乎全黑色 与沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心带黑色 5.3 生化试验
5.3.1 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。 表2 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 斜面 底层 产气 硫化氢 - + - - + + + + + + +/- +/- + - +/- + + - - - 德华氏菌 沙门氏菌Ⅲ、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌、志贺氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌 可能的菌属和种 沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱沙门氏菌Ⅲ（即亚利桑那菌） 产硫化氢菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或黑色有金属光泽 说明：在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢(H2S)阴性的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。
5.3.2 在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白陈水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管，于36±1℃培养18～24h，
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