发布时间 : 星期一 文章微生物限度检验操作指导书更新完毕开始阅读12df5f12f11dc281e53a580216fc700abb685218
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微生物限度检验操作指导书
1.0目的
规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。 2.0适用范围
适用于公司微生物限度检验。 3.0职责
化验室负责人：对本规程的实施负责。 检验人员：严格按照本规程执行检验操作。 4.0参考文件 《中国药典》2015版 5.0抽样
照《取样标准操作规程》进行。 6.0内容
6.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数
计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。 6.1.1设备、仪器及用具 6.1.1.1设备
微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30～350C）、生化培养箱（20～250C）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。 6.1.1.2仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪
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及吸头、薄膜过滤器等。 6.1.1.3用具
大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。 6.1.2试液 6.1.2.1消毒液 A．0.1%新洁尔灭溶液 B．75%乙醇溶液
6.1.2.2稀释液、试剂及配制
A．pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g，加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。
B．聚山梨酯80 C．无菌十四烷酸异丙酯 D．pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 6.1.3培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基
6.1.4操作方法 6.1.4.1试验前准备
6.1.4.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（1ml、
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10ml）、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
6.1.4.1.2开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。
6.1.4.1.3操作人员进入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。进入二更，用0.1%新洁尔灭溶液洗手，穿戴洁净无菌服、口罩、手套。
6.1.4.1.4操作前先用乙醇棉球擦手，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术镊或剪将供试品启封。 6.1.4.2供试液的制备
根据供试品的理化特征与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。 6.1.4.2.1水溶性供试试品
取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
6.1.4.2.2水不溶性非油脂类供试品
取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面
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