发布时间 : 星期一 文章细胞化学染色更新完毕开始阅读0c7eb9c62cc58bd63186bd1e
?细胞化学染色检验前言
细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。 瑞氏染色法： 瑞氏染色液的配制： 瑞氏染料（粉）1g 纯甲醇60ml
将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。制配好的染液保存于温室中一周便可应用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。 缓冲液的配制及其作用:
1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml 1% Na2HPO4 20ml 加蒸馏水至1000ml PH 6.4~6.8
?过氧化物酶染色 一、原理：
细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使
联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。 二、过氧化物酶染色法染液的配制： （1）联苯胺（Benzidine） 0.3g
95%乙醇（Ethye alcohol） 99ml
36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside） 1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。)
（2）30%mlml过氧化氢溶液：
30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。
三、结果判断：
细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。 四、临床意义：
粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。
单核系细胞：原单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞及成熟单核细胞多呈弱阳性反应。 淋巴系．巨核系．红系细胞均呈阴性反应。POX反应主要用于白血病的鉴别。 （一）过氧化物酶染色阳性 急性原粒细胞性白血病（M1、M2型）、急性早幼粒细胞性白血病（M3型）急性粒单细胞性白血病（M4型）、急性单核细胞性白血病（M5型）、急性红白血病（M6型）均可呈阳性反应，阳性率＞3%。M3型阳性反应最强，M5型反应最弱。
（二）过氧化物酶染色阴性 急性淋巴细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病（M7型）成阴性反应。阳性率＜3%。部分M1型、M5a型可呈阴性反应，M6型的幼红细胞成阴性反应。
?中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色
一、原理：细胞内碱性磷酸酶能分解磷酸萘酚AS-BI为磷酸和芳基萘酰胺，后者与
重氮盐（固兰BB）偶联，形成不溶性的兰色沉淀物。
二、试剂：
1、固定液：甲醇（AR）甲醛固定液.配方：45 ml甲醇加5 ml甲醛，混匀，
置4℃冰箱备用。
2、 缓冲液（NAP buffer）：1.05g 2-氨基-甲基-1，3丙二醇，加蒸馏水至50ml，
再加0.1MHcl10ml,再加蒸馏水至200ml，混匀，放4℃冰箱备用。
3、磷酸萘酚AS-BI贮存液：磷酸萘酚AS-BI30mg，加二甲基甲酰胺0.5ml，放0℃
以下冰箱备用。
4、染色应用液：缓冲液5ml，加磷酸萘酚AS-BI贮存液25ml，再加固兰BB 5mg，
混匀，使溶解，然后过滤待用。
5、复染液：1%核固红溶液。配方：25克硫酸铝加500 ml蒸馏水配成5%
硫酸铝。1克核固红加100 ml5%硫酸铝配成1%核固红。 三、方法：
1、血片或骨髓片自然干燥后，入固定液（4℃）30秒立即取出，蒸馏水冲洗，晾干。 2、在室温下，滴加染色应用液，染色15分钟，自来水冲洗，晾干。 3、入1.0%核固红复染液10-15分钟，流水冲洗，晾干镜检。 四、结果判定： 正常血细胞的染色反应
碱性磷酸酶主要存在于中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他血细胞均呈阴性反应。结果应根据成熟中性粒细胞胞浆内兰色颗粒所占胞浆面积，颗粒大小，颗粒多少及染色强度来判断，阴性为胞浆内无兰色颗粒。 1、分级标准：
级别 + ++ +++ 兰色颗粒占胞浆面积颗粒大小 （%） ＜50 小小 50-80 小-中等 80-100 中等-大 颗粒多少 很少 少等-中等 中等-多 染色强度 微弱-中等 中等-强 强 ++++ 100 中等和大 很多（密集、很强 甚至覆于核上） 2、量的表示：阳性率（%）、积分
3、正常值：正常人一般阳性率＜40%，以“+”阳性反应为主，阳性积分40-100。 判定结果时，在油镜下，计数100个成熟的中性粒细胞（包括中性分叶核粒细胞和中性杆状核粒细胞），计算阳性率。分为+~++++，+为1分，++为2分，依次类推，分数乘以各自细胞数，即为总积分。如：+ 10个，++13个，+++5个，++++2个，则积分为1*10+13*2+5*3+4*2=59分。分级时主要根据染色强弱度来判定。 五、临床意义：NAP染色主要用于
1． 鉴别慢粒及中性粒细胞类白血病反应，前者阳性率及积分值均极低，甚至为零。而后者呈强阳性反应，可达成100％，积分值可达400。
2． 初步鉴别急性白血病类型，急淋时NAP活性多增强，急粒时不增强。 3．初步鉴别感染的病原体，在急性细菌性感染时NAP阳性反应强，而病毒和寄生虫及结核菌感染时NAP染色结果多在正常范围 （一）生理变化：
（1）年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。儿童期各年龄大致相似，成
年期较儿童期活性减低，老年期更低。
（2）应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。 （3）月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。
（4）妊娠期的变化：妊娠期2~3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，
分娩时达高峰，产后则恢复正常。
（二）病理性变化：
（1） 感染：细菌性感染时，NAP活性显著增高，而球菌感染又比杆菌感染时高。
病毒性感染时，NAP活性常无明显变化。因此本法可帮助鉴别细菌性与病毒性感染。